Peak Plants new Chalenge

First of all my sincere appologies for the trouble with the Peak Plants website. Our web supplier has made excelent work in designing the website but very poor work in mantaining its functionality. we have to start new here.

After a few months of absence and hard work Peak Plants is back to update the blog with some great news.

-For start our work with cv Madural of Olea europaea finally gave its most significant results around the month of Septemberr. By sigificant results we mean obtaining contaminant free material with active healthy and significant growth. Here is a picture with one of our first explants to sprout with amazing energy just a month after the desinfection procedure. 

Some económical dificulties have been present since the beguining of our project, and these dificulties have made a big diference in understanding the real chalenge of starting a biotechnology venture. As result for example I have discovered in Peak Plants extremelly cheap and effective antibotics, simplified procedures in sterelization and optimization of human resources to the maximum. 

This value and competence was recenntly discovered by another Biotech venture associated to the Plansel Group in Alentejo(south of Portugal). 

IT IS WITH GREAT PROUD THAT I ANOUNCE THE MERGING OF THE 2 PROJECTS PEAK PLANTS AND BIO-MELHORA.

At Bio-melhora notable work has been made by Dr A. Peixe in establishing cultures of our most widspread and simbolic olive cultivar "Galega", witch is a similarly hard to root variety but with high market demand.

- Right now we are already producing Galega in small amounts and the biggest challenge for next year is to supply Galega regularly and start supplying Madural.

Also we are producing Matrix plants of Prunus mariana and some ornamental. All of this will be in more detail in the new web-site soon.

Peak Plants and Phytoremediation Investment --------------------#"$%%&$#$$------------------- Peak Plants e Investimento em Fitorremediação

Peak Plants is preparing itself to be the first company in Portugal to invest in Phytorremediation of Heavy Metals. More to be anounced soon...


A Peak Plants prepara-se para ser a primeira empresa de biotecnologia a investir em concreto na Fitorremediação de Metais Pesados. Mais brevemente...

YouTube Video about Phytoremediation



Video no YouTube sobre Fitorremediação (Inglês)

                                                Litodora Prostrata

S-Medium formulation (by Standardi and Catalano, 1985) Formulação S-Medium de (Standardi e Catalano,1985)

Finally the S-Medium formulation online for the Magnolia lovers.

Finalmente online a formulação do meio S-Medium para os amantes de Magnolias.

Depois de procurar insistentemente esta formulação e de ver o mesmo ser discutido em foruns aqui vai a formula:

-mais formulações em www.peakplants.com  em "peakipedia"

After searching hard and seing it discussed in several foruns here is the formula:

-more formulations in http://www.peakplants.com/   at "peakipedia"

Macro

KNO3   ----  950 mg/l

NH4NO3 ----825 mg/l 

KH2PO4 ----85 mg/l      

MgSO4 . 7H2O---- 185mg/l

CaCl2 . 2H2O ----220mg/l

Micro

AlCl3 · 6H2O--------- 0.0540mg/l

H3BO3---------------- 6.2000 mg/l

CuSO4 · 5H2O ------ 0.0300mg/l

FeC_l3 · 6H2O ------ 1.0000mg/l

MnSO4 · H2O ------ 0.0760mg/l

NiCl2 · 6H2O--------- 0.0300mg/l

KI ------------------- 0.0100mg/l

ZnSO4 . 7H2O------- 1.0000mg/l

Organics

D-Biotin---------------------0.1mg/l

D-Calcium Pantothenate-----100mg/l

myo-Inositol-----------------10,000mg/l

Nicotinic Acid---------------100mg/l

Pyridoxine•HCl--------------100mg/l

Thiamine•HCl----------------100mg/l

More info soon.....

Micropropagação de oliveira Madural Micropropagation of olive trees of the variety Madural

Desde maio do ano passado que tentamos estabelecer um protocolo de micropropagação de oliveiras da variedade Madural. Até à data enormes e harduos progressos têm sido feitos no sentido de eliminar contaminações endógenas que após uma primeira fase de estabelecimento in vitro teimam em ressurgir, sugerindo ser necessária uma abordagem de enorme persistencia na procura dos antibióticos e antimicóticos ideais para sanitar completamente as plantas produzidas na certeza de que estas trarão maiores porduções quando no campo.

-A Micropropagação de oliveira é desde há muito o objectivo de varios investigadores por toda a bacia do mediterrãneo e desde os primeiros trabalhos até ao relativamente vasto conhecimento da espécie que existem hoje, duas certezas existem apenas, não é facil mas é a unica forma de obter plantas sãs e garantidamente livres de pestes, isto porque a panóplia de microorganismos que habitam o interior dos tecidos desta espécie exigem uma eliminação faseada dos mesmos.

-Por outro lado a fraca produção in vitro de brotação lateral faz com que na maior parte dos casos o alongamento sucessivo dos explantes seja a unica forma de obter taxas de propagação aceitaveis, isto sem contar com o elevado preço da unica hormona concensualmente eficaz nesse alongamento, a Zeatina, cujo preço ronda os 2 euros por miligrama.

A elevada qualidade do Azeite produzido, a boa produção e a robustez desta variedade às condições climatericas no entanto, faz deste trabalho uma entusiástica missão na procura de manter de boa saúde as tradições e os valores etnobotanicos desta nobre região do pais, onde se produzem seguramente alguns do mais apreciados azeites do mundo. Neste momento iniciamos novos testes de propagação aproveitando o facto de estarmos a obter uma melhoria na ordem dos 60% no estabelecimento de explantes.

The Madural olives are a very widely spread variety of olive tree in the province of Tras-os-Montes in the northeast of Portugal. Among other caracteristics this variety of olea, targeted mostly for olive oil production, has great resistence to low temperatures, a good productivity and high production of linoleic acid.

A protocol for micropropagation of Olea europaea var Madural is being investigated at the Peak Plants Laboratory since May of last year. This work has been outsourced from a local company (in the town of Mirandela) wich every year spends significant resources in producing young individuals of this variety but with little success when compared with varietys such as Negrinha de Freixo or Cobrançosa for example.

 The percentage of survival in heated rooting benches with periodic water spraying and controled temprature is no higher than 10% in most trials, and the mortality of the new plants is high due to a weak root system.

So far we have made significant progress in finding the right method for desinfection but no acceptable growth has been achieved. This is mostly because only recently, good percentages of survival and establishment of the explants have been achived. Previous trials with 2iP and Zeatine have shown good development o new nodal segements (up to 5 new nodes in less than a month ) but recalcitrant endogenous infections have killed most of the material established in early desinfection trials.

In the next couple of months with the triple of material ready for hormone testing, we are confident that its going to be possible to start multiplying the shoots and satisfy our costumer´s high demand for these plants.

The problem of endogenous and recalcitrant infections in olea is by far the greatest obstacle for obtaining healthy in vitro cultures, and since the only concensual growth regulator for olive is the highly expensive Zeatin (with a price of more than 2 eur a miligram) extreme surveillance of the cultures is a constant demand in order to avoid great losses. Our realistic prevision is than sometime during the first semester of this year we will start the mass production of this olea variety, and somewhere in the beguining of 2011 start to output the first aclimatised plants.

Micropropagação de Ilex aquifolium Micropropagation of Ilex aquifolium

A maneira mais facil de obter culturas assépticas de Azevinho para micropropagação é pelo isolamento e cultura de embriões Zigóticos, retirados da semente. Esta tecnica é tambem valida para outras espécies de Ilex. É uma tecnica pratica pois a sementes são robustas e permitem uma desinfecção grosseira com lixiva e alcool etílico ou alcool etílico e água oxigenada, sem que se danifiquem os embriões. A desvantagem está principalmente no trabalho laborioso de abrir as sementes e isolar os embriões à lupa e em camara de fluxo laminar. Uma outra desvantagem será o facto de por ser dioica ser impossivel determinar o sexo das plantas micropropagadas o que é mau visto que apenas as femeas produzem a atractiva baga vermelha. Em todo o caso existem hoje um sem número de variedades hermafroditas que podem ser igualmente clonadas por esta técnica. -E é tambem sabido que as plantas germinadas in vitro têm melhor capacidade de enraizamento e um crescimento mais acentuado.

Para isolamento dos embriões é conveniente deixar as sementes em água durante cerca de dois dias, e trata-las com um antifungico por duas a três horas antes da desinfecção mais agressiva com os outros desinfectantes. O antifungico que tenho usado é o "Switch" da Syngenta que se tem mostrado um excelente substituto do muito aclamado em cultura de tecidos "Benlate".

Após a remoção dos embriões que se encontram sempre num dos extremos da semente estes devem ser colocados com a ajuda do bisturi imediatamente na superfície do meio. O meio adequado é o WPM (Woody Plant Medium) com adição de 20g/L de sacarose 7g/L Agar de nivel técnico, e Ph ajustado para 5,8. As placas de petri nas quais se podem inocular um grande numero de embriões devem depois ser colocadas no escuro durante cerca de 3 samanas a uma temperatura de cerca de 22 graus ao fim das quais já se poderão ver os primeiros primordios foliares de algumas das plantulas.-Não é aconselhavel colocar demasidos embriões numa só placa pois uma infecção numa placa pode destruir varias horas de trabalho. Depois de desenvolvidas as plantulas e na fase de propagação, as infecções em azevinho são raras dado que esta espécie produz alcaloides com propriedades antibióticas. Ja pensei em fazer culturas mistas com espécies mais susceptiveis, mas ainda não testei este metodo.

Propagação

A propagação de Ilex é feita exactamente nas mesmas condições apenas com adição de 1mg/L de BAP e remoção da raiz dos explantes. Já li mais do que uma vez que os azevinhos podem ser multiplicados prolificamente em meio liquido em recipientes tipo biorreactor mais ainda não testei este método.

The easyest way available to obtain asseptic cultures of Iex aquifolium for micropropagation, is by isolation and culture of zigótic embryos extracted from the seeds. This tecnhique is also valuable for other Ilex species.

It is a pratical method for obtaining fast growing cultures because the hard seeds can be roughly desinfected without damaging embryos thus obtaining a contaminant free culture.

The disadvantage of this technique is the hard labour involved in opening the seed and isolating the embryo from seed endosperm, under a stereomicroscope. Another theoretical disadvatage is the fact that as an ornamental plant only the females produce the atractive red coloured fruits. On the other way, cultures coming from this technique have much more vitality and rooting capacity than ones taken from shoots colected in adult plants, and since a number of monoic species within the genre are currently available the second disadvantage tends to disapear.

For isolation of the embryos it is advisable to leave the seeds in water for a couple of days before the desinfection process (to soften the seed coat), wich can be made with bleach, ethil alcool and/ or hidrogen peroxide combinated. Also it is advisable to use an antifungal agent in the seeds after the removal of the pulp, lately i´ve been using"Switch"by Syngenta wich has a combination of a systemic and a superficial active principle, it works fine as a substitute of the widely aclaimed in tissue culture "Benlate".

After removal of the embryos they should be imediately layed on the surface of the medium wich is the WPM formulation (Woody Plant Medium) added with 20g/L of sucrose 7g/L agar of technical grade and PH adjusted to 5,8.

The Petri dishes, in wich you can easily fit as many embryos as you want, should then be placed in the dark for about 3 weeks at a temperature of 22 degres celcius, after wich you will see some plants already displaying the first set of leaf primordia.- It is not advisable to overcroud the petri dishes with embryos since a single infection can waste hours of precious work.

After development infections in Ilex cultured flasks are rare because Ilex is though to pocess some antibiotic alcaloids. I am even thinking of testing mixed in vitro cultures with this species to naturally fight infections in other cultures. You can go ahead and try that for me if you want :).

Propagation

To start multiplying your established in vitro cultures of Ilex, all you have to do is cut the root of the explants and transfer them to the exact same medium but with 1mg/l of BAP.

I have reed more than once than Ilexes are suitable for culture in liquid medium bioreactors but i havn´t tryed it yet. As soon as i know more i will publish....

As maravilhas do alho The wonders of garlic

O alho na micropropagação

As magníficas propriedades do alho são sobejamente conhecidas. Numa das ultimas mensagens mencionei a sua utilização como desinfectante e antibiótico para eliminar infecções tardias em sementes de Phormium tenax. Faço agora uma pequena descrição de como deve ser feita a sua utilização e quais a propriedades deste magnifico e acessivel antibiótico.

O antibiótico mais poderoso do alho é a Alicina, existem no entanto um numero alargado de outras substancias com efeitos antifungicos, antioxidantes e regeneradores. Concentremo-nos na Alicina.

A Alicina é uma substancia formada principalmente quando há rotura das parecedes celulares das celulas do alho, nesta altura a enzima Alinase entra em contacto com a Alina formando o antibiótico Alicina. Este fenómeno ocorre muito rapidamente mas a Alicina é uma substancia instável e sensivel à temperatura. A utilização da Alicina é no entanto de elevado interesse devido à capacidade de penetração excelente deste antibiótico em tecidos vivos. Para obter uma solução estável deste antibiótico deve proceder-se do seguinte modo:

-Desinfectar alguns dentes de alho ainda com a pelicula exterior ,em alcool 70% por imersão durante alguns segundos ou aspersão e esperar que a pelicula externa seque em assépsia.

-Retirar a pelicula externa com material devidamente esterelizado.

-Colocar os dentes num recipiente e imergi-los em água esteril, normalmente eu uso caixas de petri, cerca de 3 dentes de alho são suficientes para fazer uma solução suficientemente concentrada numa caixa de petri de 10cm cheia com água.

-Fazer cortes nos dentes de alho até estes se ficarem completamente triturados assegurando sempre que os cortes acontecem debaixo de água de forma a estabilizar a molecula a alicina imediatamente após a sua formação.

Nota: pensa-se que elementos desestabilizadores da molécula de Alicina sejam tambem hidrosoluveis o que faz com que em soluções aquosas de alho, estes esteja menos disponiveis para a degradação da molécula. As soluções criadas da forma acima descrita podem manter-se activas durante cerca de um mês no maximo se guardadas no frigorífico, sendo que quanto mais rapidamente forem utilizadas melhor. Os periodos de exposição em tecidos vegetais sensiveis devem ser mais reduzidos, cerca de uma hora.

The garlic in micropropagation

The magnificient properties of garlic have been widely described throughout the history. In one of my last posts i have mencioned a garlic solution to eliminate recalcitrant infections on inoculated seeds of Phormium tenax. Now i will make a small description of the caracteristics of this inexpensive antibiotic and how to take advantage of them.

The most powerfull antibiótic available in garlic is the Alicin, nevertheless there is a wide range of others like antifungal and antioxidant agents as well as regenerative substances.

Alicin is a substance formed mainly when there is a rupture of garlic cell walls and two substances come together, Alinin and Alinase. The enzyme Alinase converts then Alinin into Alicin in wich we will focus. This reaction is very fast but Allicin itself is very unstable at normal environmental conditions. The utilization of Alicin is of high interest though because this antibiótic has an excelent penetration coeficient in live tissues. To produce a stable Alicin solution the following procedure should be used:

- Desinfect a few garlic goves with a brief imersion in 70%ethil alcool or preferably by spraying them with the alcool in both sides. Wait until the goves are dry.

- Place 3 goves in a sterile petri dish and remove de outside membrane carefully.

-Fill the petri dishes with sterile destiled water and start cuting the goves in smal slices making sure that the cut is always being made under the water. Repeat the cutings untill the garlic is completelly choped in small pieces.

-The solution is now an active concentrated antibiótic, use it or place it in the refrigerator.

Note: this solution will stay active for up to 30 days losing its activity progressivelly. It´s usage with sensitive plant tissues like new shots, must be for a short period of exposure or tissues will be damaged.